El virus de la influenza A (IAV) es un patógeno que presenta riesgos significativos para la salud humana. Por lo tanto, es fundamental desarrollar estrategias para prevenir la enfermedad de la influenza. Se han realizado muchas pantallas de pérdida de función para identificar las proteínas del huésped requeridas para la infección viral. Sin embargo, no ha habido una pantalla sistemática para identificar los factores del huésped que cuando se sobreexpresan son suficientes para prevenir la infección. En este estudio, utilizamos la tecnología de activación CRISPR / dCas9 para realizar una pantalla de sobreexpresión de todo el genoma para identificar los factores de restricción de IAV. El golpe más importante de nuestra pantalla, B4GALNT2, mostró actividad inhibitoria contra virus de influenza con una preferencia de receptor de ácido siálico a2,3. De hecho, la sobreexpresión de B4GALNT2 evitó la infección de todas las cepas del virus de la gripe aviar analizadas, incluidos los subtipos H5, H9 y H7, que previamente han causado enfermedades en humanos. Por lo tanto, hemos utilizado la tecnología de activación CRISPR / dCas9 para identificar un factor que puede eliminar por completo la infección por virus de la influenza aviar.
Se han realizado varios tipos de pantallas para comprender los requisitos de infección viral, replicación o propagación. El trabajo previo sobre IAV se ha centrado casi exclusivamente en la pérdida genética de los estudios de función (es decir, pantallas de ARNi) identificando las proteínas del huésped que son necesarias para permitir la infección por IAV.
Si bien este trabajo ha sido fundamental para identificar los factores que permiten la replicación del virus, ha faltado una pantalla sistemática de sobreexpresión para identificar los factores del huésped que pueden inhibir la replicación del virus. El principal obstáculo para realizar pantallas de sobreexpresión ha sido la tecnología. Aunque en teoría se podrían realizar pantallas de sobreexpresión de ADNc, varias limitaciones importantes han impedido su uso generalizado:
1.) Es costoso y difícil clonar o sintetizar todos los supuestos marcos de lectura abiertos (ORF) en el genoma humano,
2.) Es es difícil conocer o capturar la complejidad de la variación de la isoforma de la transcripción para un gen dado,
3.) La expresión de los ADNc a menudo está limitada por restricciones de tamaño (por ejemplo, en vectores de expresión virales).
Se ha demostrado que el trabajo reciente que modifica la tecnología CRISPR / Cas9 para reclutar activadores transcripcionales, llamado mediador de activación sinérgica CRISPR (CRISPR SAM), es eficaz para las pantallas de sobreexpresión del genoma completo.
En este trabajo, se ha adaptado la tecnología CRISPR SAM para detectar genes que, cuando se sobreexpresan, inhiben completamente la infección por IAV. Descubriéndose así genes inhibidores, pero identificamos notablemente una glucosiltransferasa (B4GALNT2) que modificó el ácido siálico que contiene glicanos y previno la infección por cada cepa aviar de IAV probada. Por lo tanto, el uso de la tecnología de activación del gen CRISPR ha permitido la identificación de un gen del hospedador que potencialmente puede ser objetivo para prevenir las infecciones de influenza aviar.
Net grafia:
NCBI [Internet ] A CRISPR activation screen identifies a pan-avian influenza virus inhibitory host factor [Citado 24 Dic 2017] Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5568676/
